PCR multiplex para la identificación de los genes luk-s y luk-f codificantes del marcador leucocidina valentine panton, simultanea a la detección de resistencia a meticilina en muestras de bacteriemias causadas por Staphylococcus aureus

Abstract

En el presente trabajo se desarrolló una técnica de PCR multiplex capaz de identificar el gen de leucocidina Valentine Panton, simultáneo a la detección de la resistencia a la meticilina por el gen mecA. Este ensayo es simple, rápido y confiable y además ofrece el potencial de una detección rápida, lo que ofrece varias ventajas sobre los ensayos clásicos de microbiología en lo que refiere a la resistencia a la meticilina. Las muestras con las que se trabajó fueron tomadas de aislados clínicos provenientes de bacteriemias causadas por Staphylococcus aureus, lo que de por sí indica un cuadro grave en el paciente. Dichas muestras fueron recolectadas desde el año 2004 en dos hospitales de la ciudad de Quito y en Zurita&Zurita Laboratorios, lo que brindó una muestra homogénea y además permitió hacer una evaluación de la prevalencia del gen PVL. La prevalencia de este gen fue de 56.36%, a nivel mundial este valor suele ser <5%. Sin embargo al ser muestras provenientes de bacteriemias, se comprobó que el gen de leucocidina Valentine Panton está asociado a la virulencia de la bacteria. En cuanto a la resistencia a la meticilina se observó que el 52.73% de las muestras presentan el gen y que el 96.55% de estas lo expresan, lo que se puede deber a otro tipo de factores como lo son estrés en las bacterias o errores en las especificaciones estándar de los agares Mueller Hinton que son usados en los antibiogramas. Estas alteraciones suelen darse en cuanto a pH del agar o milímetros de grosor del mismo. Así mismo se logró determinar un porcentaje del 82.72% de probabilidad de que una persona con bacteriemia causada por Staphylococcus aureus, que presenta el gen de la resistencia a la meticilina mecA, posea además el gen PVL. Por otro lado el conocer que el gen de leucocidina Valentine Panton está compuesto por dos subunidades llamadas Luk-S y Luk-F, permitió realizar el análisis de estos dos componentes por separado y se obtuvo que la subunidad S se encuentra en mayor proporción a pesar de que la bacteria no presente el gen completo PVL, siendo 12 de 24 las muestras que presentan dicha unidad y en el caso de la subunidad F, fueron 5 las muestras que la presentaron, dando un total de 7 muestras que no contienen ninguno de los dos componentes. Por último se obtuvo que la prueba PCR multiplex para la identificación de la leucocidina Valentine Panton simultánea a la detección de la resitencia a la meticilina es 100% sensible y 96.55% específica.