Estandarización de la técnica molecular PCR mediante la amplificación de la secuencia 16s RDNA para la detección de Thiobacillus thioparus e identificación de dos bacterias degradadoras de tiosulfato de plata aisladas del volcán Tungurahua y de la Calera Machachi, Ecuador, 2007

Abstract

En las florícolas del Ecuador para conservar las flores cosechadas se utiliza el tiosulfato de plata (STS: AgS2O3), agente químico que retarda su envejecimiento al inhibir la formación de etileno. Sin embargo, el STS es un potente productor de daños ambientales, pero al ser inevitable el uso de STS en la industria ecuatoriana de las flores, se buscó un tratamiento biológico para la eliminación del STS proveniente de las aguas de post cosecha de flores sensibles al etileno. El tratamiento biológico consiste de: i) oxidación del STS usando bacterias ii) bioadsorción del catión plata con hongos pelletizados Cladosporium cladosporioides y iii) recuperación del metal bioadsorbido. En la oxidación del tiosulfato fueron utilizadas varias bacterias nativas; sin embargo, solo dos bacterias aisladas de aguas sulfurosas del volcán Tungurahua y de La Calera, Machachi metabolizaron eficazmente el tiosulfato comparadas con Thiobacillus thioparus (bacteria que degrada STS). Para la identificación de las dos bacterias usadas en el tratamiento biológico, se emplearon pruebas bioquímicas y métodos moleculares. Las pruebas bioquímicas proporcionaron muchas ambigüedades e inconsistencias impidiendo decidir si las bacterias nativas pertenecían o no a la especie Thiobacillus thioparus. De los métodos moleculares, se seleccionó la amplificación de la secuencia 16S rDNA mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR siglas en inglés), secuenciación y análisis de secuencias, usando como control positivo la cepa bacteriana Thiobacillus thioparus ATCC 23645. Los ensayos de amplificación con primers específicos para la secuencia 16S rDNA de Thiobacillus thioparus demostraron que las dos bacterias nativas no eran Thiobacillus thioparus. Sin embargo, al secuenciar y analizar la región 16S rDNA en las dos bacterias nativas, se pudo conocer que estos dos microorganismos aislados de ambientes ecuatorianos podrían pertenecer al género Pseudomonas, al presentar un 99% de semejanza con algunas secuencias 16S rDNA de varias cepas de Pseudomonas