Estudio de la infección de Fusarium proliferatum y Fusarium oxysporum en cebolla blanca usando cepas transformadas que expresan la proteína verde fluorescente GFP y la proteína roja fluorescente TDtomato

Abstract

El estudio de hongos filamentosos patógenos de plantas es facilitado al usar proteínas auto fluorescentes como marcadores visuales para observar el desarrollo del hongo en la planta. Se emplearon cepas de Fusarium oxysporum y Fusarium proliferatum transformadas con las proteínas reporteras GFP y tdTomato con el objetivo de estudiar la infección empleando microscopia epifluorescente al ser inoculadas en tejidos de cebolla perla. Se mantuvo a las cepas en medio SNA. La inoculación de bulbos y hojas se hizo por medio de pedazos de agar. Para inocular semillas y raíces se prepararon suspensiones de esporas de los medios de cultivo. El material vegetal fue mantenido en una cámara de crecimiento con fotoperiodo de 12 h a 25°C. Los resultados mostraron que todas las cepas lograron colonizar la epidermis, penetrar hacia el interior del córtex y llegar al cilindro vascular central de la raíz de plántulas a los 26 ddi y en bulbos a los 15ddi. Se encontró que a los 14 ddi la zona del primordio de hoja fue colonizada sobre su epidermis pero el córtex cotiledonar permaneció libre del hongo. En hojas y escamas de bulbos a los 4ddi, tanto F. oxysporum como F. proliferatum crecieron superficialmente a menos que se aplique daño mecánico en el tejido con lo que las cepas crecieron intercelularmente en el córtex. Las proteínas reporteras GFP y tdTomato permitieron el estudio rápido y fácil del progreso de la infección de F. oxysporum y F. proliferatum en tejido vivo de cebolla perla.