Análisis de la expresión del Gen PR-1 meidante la técnica de PCR en tiempo real (RT -PCK ) en tomate (Solanum Lycopersicum) infectado con phytophtora infestans

Abstract

La respuesta de las plantas frente a la presencia de patógenos, ya sean estos de tipo viral, bacteriano, fúngico, y en este caso antioomicótico con la infección de Phytophthora infestans, está enmarcada dentro del sistema SAR, donde los genes PR y especialmente los genes PR-1 son sus máximos representantes. Los genes PR-1 son los genes de mayor expresión dentro de la clasificación de estos genes, ya que las proteínas PR-1 representan entre el 1 y el 2% de las proteínas totales de la hoja. Existen varias isoformas de las proteínas PR-1 en donde la isoforma básica PR-1b1 fue el objeto de nuestro estudio, debido a que es la isoforma de mayor expresión y la más estable en plantas. En este estudio, la expresión de la isoforma PR-1b1 fue evaluada en plantas de tomate de las variedades Indeterminada Alaska, Flora Dade, Santa Clara 5800 y Cherry infectadas con el patógeno Phytophthora infestans. Las plantas fueron inoculadas con una solución de 9000 esporangios por mL y las hojas se recolectaron en nitrógeno líquido a las 0, 24, 48 y 72 horas de incubación. Se extrajo el RNA total de las hojas de tomate y se eliminó el DNA contaminante con la enzima DNAsa. El RNA tratado se usó como molde para la síntesis de cDNA mediante la reacción de transcripción reversa (RT). El cDNA se uso como templado para la PCR en tiempo real. El análisis de expresión génica se implementó con los valores de Ct obtenidos de los genes PR-1b1 y GAPDH aplicando el método de ¿¿Ct. Al final del experimento, se pudo determinar que las variedades Indeterminada Alaska y Flora Dade presentaron los niveles más altos de expresión, seguidas por la variedad Santa Clara 5800 y por último la variedad Cherry. Los resultados muestran las diferencias existentes entre las variedades evaluadas, lo que supone que las diferencias morfológicas y fisiológicas entre cada una de las variedades son la causa de la variación en la expresión. El programa de mejoramiento genético con los datos de la expresión génica del gen PR- 1b1 supone el primer paso para la obtención de variedades de alto valor comercial, con alto grado de tolerancia a la infección de Phytophthora infestans.