Obtención de cultivos in vitro de raíces pilosas de Nicotiana tabacum L. mediante la transformación con Rhizobium rhizogenes

Abstract

La industria química del Ecuador no cuenta con sistemas de producción de moléculas para la elaboración de productos químicos. Una alternativa para solventar este problema es la producción de moléculas a través del sistema de cultivo de raíces pilosas. La presente investigación tiene como objetivo obtener cultivos in vitro de raíces pilosas de la planta modelo Nicotiana tabacum L. (tabaco) mediante la transformación con Rhizobium rhizogenes. Para esto se utilizó explantes de hojas de tabaco y se emplearon las cepas de R. rhizogenes 15834, A4 y LBA 9402. Con el objetivo de diferenciar entre raíces adventicias y raíces pilosas en los explantes, se realizó la inserción del plásmido pSiM24-GUS en las bacterias. El protocolo implementado para la obtención de raíces pilosas fue la incubación de los explantes con el inóculo bacteriano por 20 minutos, seguido por un tiempo de cocultivo de 3 días y posterior cambio a medio de inducción de raíces. Para distinguir entre raíces adventicias y raíces pilosas se realizó una comprobación visual de las características fenotípicas de geotropismo, crecimiento de raíces ramificadas y profusión de pelos radiculares. La cepa que generó un mayor porcentaje de explantes con raíces fue la LBA 9402 con una media de 96 %, seguido por la A4 con un 76 % y la 15834 con 67 %. No hubo diferencias significativas en el porcentaje de raíces pilosas obtenidas con las diferentes cepas. Se verificó mediante PCR la transferencia del gen rolB de la bacteria al genoma de la planta. Finalmente, se obtuvieron cultivos in vitro de raíces pilosas de Nicotiana tabacum L. con las características fenotípicas típicas de la transformación con R. rhizogenes.