Diseño y optimización de un sistema de amplio espectro basado en la amplificación de un fragmento del Gen ADN Ribosomal 16s mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para su aplicación como método de diagnóstico e identificación molecular en infecciones bacterianas locales

Abstract

Las infecciones son procesos dinámicos, generalizados o localizados, que implican la invasión del cuerpo por microorganismos patógenos y la reacción que estos y sus toxinas provocan en los tejidos, resultando perjudiciales para el funcionamiento normal y supervivencia del huésped. En microbiología clínica, los métodos actuales para diagnosticar infecciones presentan grandes desventajas ya que se basan principalmente en la identificación de microorganismos patógenos mediante pruebas bacteriológicas convencionales, las mismas que presentan baja precisión y sensibilidad, dificultando la administración de tratamientos efectivos y adecuados al paciente. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar y optimizar un sistema de detección e identificación bacteriana rápido y sensible, empleando técnicas de biología molecular, como complemento a las técnicas tradicionales de cultivo en caso de sospecha de infección. Con este fin, se amplificó un fragmento del gen ADNr 16S mediante un sistema de PCR en tiempo real de amplio espectro basado en un diseño multisonda, el mismo que incluyó la utilización de un par de cebadores universales, una sonda universal para detección bacteriana, dos sondas para la discriminación Gram de bacterias y seis sondas específicas para la identificación de seis especies bacterianas de relevancia clínica. El sistema de PCR en tiempo real propuesto presentó una alta sensibilidad analítica, demostró ser eficiente y reproducible en la detección de bacterias de relevancia clínica en controles positivos y en muestras clínicas en un ensayo de campo limitado. La evaluación posterior del sistema en muestras clínicas de pacientes con sospecha de infección, apoya la utilidad del mismo para la detección de infecciones, sin embargo, puede presentar limitaciones en el rango de identificación de patógenos, debido al número de sondas usado. Es necesario realizar estudios a mayor escala para validar los resultados del presente trabajo.