Aplicación de la técnica de hibridación por fluorescencia IN SITU (FISH) para el diagnóstico de la translocación BCR/ABL

Abstract

Se realizó el cultivo de las bacterias E.coli BCR/ BA 72 M14/ 22q11.2.11.9 y E.coli ABL/ dJ1132H12/ 19q 34.11 en caldo LB combinado con Cloranfenicol y Kanamicina, obteniéndose concentraciones de 3x108 y 6 x108 bacterias/ml. respectivamente. Se extrajeron los plásmidos portadores de las sondas de BCR/ABL por Miniprep. Se comprobó el peso y pureza del ADN extraído por electroforesis y espectrofotometría, obteniéndose una concentración promedio de 2.2 µg/µl. de ADN y un radio de pureza de 2. Se desarrolló la Nick translation para permitir que la sonda se una al marcador fluorescente, obteniéndose fragmentos marcados de ~800 bp. para la sonda de BCR y de ~100 bp. para la sonda de ABL. Se extendieron placas con las muestras de médula previamente purificadas y se las sometió a un tratamiento de variación de temperaturas, pH y deshidrataciones para preparar a las células para la hibridación. Dicha hibridación se efectuó colocando la sondas marcadas. Se efectuó una contratinción con DAPI. La observación al microscopio mostró resultados exitosos para las señales de las sondas fluorescentes. Los resultados de las muestras analizadas fueron cotejados con los datos obtenidos en Citogenética molecular y PCR, encontrándose a las tres pruebas asociadas y concordantes. En relación a la PCR, la FISH se mostró un 17% más sensible y un 98% tan específica que la Citogenética convencional