Optimización del ensayo inmunoenzimático (Celisa) para la detección de anticuerpos IgG contra Brucella spp. En el ganado bovino

Abstract

Brucella abortus es una bacteria Gram negativa del género Brucella que afecta a diferentes especies animales así como a humanos, considerada como el agente infeccioso principal de la brucelosis bovina. El control de la enfermedad en Ecuador se basa en el sacrificio de los animales enfermos y la vacunación. El uso de la vacuna Cepa 19 presenta un reto en el diagnóstico por la presencia de falsos positivos, impidiendo una discriminación adecuada entre animales sanos vacunados y enfermos, generando pérdidas económicas importantes en la industria pecuaria. El presente trabajo de investigación busca la optimización del ensayo inmunoenzimático competitivo (cELISA) como una alternativa confiable para el diagnóstico de brucelosis en el ganado bovino, discriminando los falsos positivos y facilitando el control de la enfermedad. Las muestras de suero bovino del estudio fueron obtenidas de otras investigaciones realizados en el Laboratorio de Biotecnología Animal de la Universidad de las Fuerzas Armadas–ESPE, recolectando un total de 141 muestras procedentes de la parroquia San Pedro de Suma (El Carmen, Manabí) y la Isla Santa Cruz (Galápagos), además de 25 muestras de suero bovino procedentes de AGROCALIDAD. La prueba cELISA se optimizó a una concentración de antígeno lipopolisacárido (LPS) de 1 µg/mL, dilución de suero 1/50, dilución del anticuerpo monoclonal 7F9 1/320, conjugado HRP IgG anti-ratón (Kit comercial) 1/2; con un punto de corte de 26.88% de inhibición. La aplicación de la prueba cELISA determinó la prevalencia aparente de 42.86%, 1.18% y 16% para las muestras del cantón El Carmen, Isla Santa Cruz y AGROCALIDAD, respectivamente. La validación de la prueba estableció una sensibilidad y especificidad del 83.33%, coeficiente de variación del 10.67% y coeficiente de correlación intra-clase del 83.62% (Kappa=0.727, p<0.05). Los resultados obtenidos indican la necesidad de mejorar las técnicas de diagnóstico para el control y prevención de la brucelosis en el país.