Diagnóstico molecular de estomatitis vesicular bovino y filogenia del agente causal presente en muestras colectadas en las regiones Costa y Oriente del Ecuador

Abstract

La estomatitis vesicular (EV) es una enfermedad causada por el virus de estomatitis vesicular (VEV) que se caracteriza por la presencia de vesículas y úlceras en la lengua, tejidos orales y patas; síntomas indistinguibles de la fiebre aftosa en bovinos, por lo que es importante obtener un diagnóstico rápido y concluyente. En este proyecto se busca obtener un método diagnóstico de estomatitis vesicular bovina e inferir la filogenia del agente causal a partir de muestras colectadas en las regiones Costa y Oriente del Ecuador. En este estudio se realizó la extracción de ARN de muestras de epitelio bovino, se realizó la retro transcripción y la PCR de punto final con cebadores para la fosfoproteína P de VEV; el análisis filogenético se realizó en base a secuencias obtenidas a partir de productos de PCR purificados de muestras de VEVI-1 y VEVNJ. Se logró la estandarización óptima de VEVNJ; la presencia del virus se determinó por la amplificación de un fragmento de 642 pb, observándose un límite de detección de 1 fg/µl de producto de PCR purificado. No se logró una estandarización óptima de VEVI-1 pues se observó la presencia de productos inespecíficos, sin embargo, el fragmento de interés de 650 pb sí corresponde al VEVI-1 y por lo tanto se usó para el análisis filogenético. No se logró la estandarización óptima para la detección de VEVI-2 y VEVI-3 en muestras de epitelio bovino. El análisis filogenético mostró que las secuencias obtenidas en este proyecto se agrupan únicamente en VEVI-1 o VEVNJ.