Obtención de la molécula interferón alfa canino (IFN-aC) recombinante expresada en escherichia coli, como alternativa al tratamiento de infecciones virales

Abstract

Los interferones (IFN), son una familia de citoquinas importantes dentro de la activación y regulación de las respuestas inmunes innata y adaptativa. Permiten la transcripción de cientos de genes con actividad antiviral y antiproliferativa. El IFN-a perteneciente a los IFNs tipo I, posee múltiples aplicaciones terapéuticas en el tratamiento de diversas enfermedades de origen viral, tanto en humanos como en animales. En el campo veterinario se conoce que el 2,5% de las muertes en perros son ocasionados por infecciones virales. Hasta el momento no se conoce un tratamiento adecuado para enfermedades como el distemper, la rabia o la parvovirosis. Los tratamientos existentes permiten únicamente mitigar los síntomas, pero no combaten con el agente causal de la enfermedad. En el presente trabajo se realizó una producción de IFN-a canino (IFN-aC) recombinante en un sistema de expresión de Escherichia coli BL21 codon plus, en donde se obtuvo la proteína como cuerpos de inclusión con un porcentaje de pureza del 83,84%. El replegamiento de la proteína se llevó a cabo con una solubilización en urea 8M y ß-mercaptoetanol, y una posterior renaturalización por diálisis en PBS y sucrosa, obteniendo un rendimiento de 0,56 g/L de cultivo. Se determinó la existencia de actividad biólogica con la utilización del IFN-aC producido, sobre células MDCK, en donde se observó un aumento del ARNm en los marcadores antivirales: proteína kinasa R (PKR) y 2',5'-Oligoadenilato Sintetasa 2 (OAS-2).