Implementación de la técnica CRISPR/Cas9 en Rosa spp. para la edición del gen de la enzima fitoeno desaturasa (PDS): Fase I

Abstract

Las rosas son los arbustos ornamentales más importantes del mundo, su edición genética busca mejorar características físicas para satisfacer la demanda comercial y reducir las pérdidas de los cultivares por ataques de plagas o estrés ambiental. El mecanismo de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR) es un sistema de la naturaleza conformado por un ARN guía (sgRNA) y la endonucleasa Cas utilizados como una herramienta conjunta de edición génica. El presente proyecto de titulación tiene como objetivo el implementar la tecnología CRISPR/Cas9 en la edición genética de cuatro variedades de rosas en el gen de la enzima Fitoeno desaturasa (PDS). Se implementó esta tecnología para la edición in vitro de los exones 5, 6, 7 y 8 de PDS de rosas, como una prueba de concepto que permita validar CRISPR/Cas9 en estas plantas. Primero se realizó la extracción de ADN y amplificación del gen objetivo, posteriormente se analizó la variabilidad alélica de la región en todas los cultivares para diseñar los sgRNA. Las guías obtenidas tuvieron altos porcentajes de especificidad y mínimos efectos off-target, en consecuencia, se obtuvo un experimento exitoso en escisión in vitro de todos los exones por CRISPR/Cas9. Se recomienda realizar estudios in vivo para evaluar la eficiencia del ensayo y determinar los mutantes mediante estudios de restricción.