Obtención y purificación de proteína MIC3 de Toxoplasma gondii

Abstract

La toxoplasmosis es una enfermedad parasitaria zoonótica, que tiene prevalencia a nivel mundial e importancia médica y veterinaria. Es causada por el parásito protozoario obligado Toxoplasma gondii y afecta en su mayoría a los animales de sangre caliente, incluido a los humanos. Su fácil contagio, radica en la ingesta de alimentos contaminados o poco cocidos que contengan quistes tisulares viables u ooquistes. También afecta a pacientes inmunodeprimidos, y puede resultar en encefalitis y retinocoroiditis. Sin embargo, raramente se transmite de manera congénita. En particular, T. gondii, requiere de orgánulos que ayuden en su motilidad, como la proteína micronema 3 (MIC3), que actúa como una especie de puente entre el parásito y las células huésped, por lo que, su obtención mediante sistema de expresión procariota es de importancia en el presente estudio. El gen de interés MIC3 de 1080 pb fue capaz de expresarse en la cepa de E. coli Bl21 mediante el sistema pET22-b (+). Así también, los ensayos de lisis realizados resultaron coincidir con el tamaño de la proteína MIC3 cuando no forma dímeros (38 kDa). Además, se realizaron ensayos de purificación tanto de cromatografía de afinidad, como de intercambio iónico, que resultaron en la obtención de fracciones positivas respecto a la proteína de interés que luego se verificaron mediante ensayo de Western Blot y electroforesis (SDS-PAGE).