Identificación del virus de papiloma humano mediante PCR-RFLP y posterior genotipificación en muestras de tejido cervical parafinado, con diagnóstico histopatológico de displasia severa o cáncer in situ, procedentes del Hospital de SOLCA Núcleo Quito

Abstract

En el Ecuador, el cáncer cérvico-uterino ocupa el primer lugar como causa de muerte oncológica en población femenina. A pesar de las medidas tomadas para disminuir éstos índices, los métodos tradicionales de screening han sido insuficientes. Estudios a nivel mundial han identificado a la infección con Virus de Papiloma Humano (VPH) como causa necesaria para el desarrollo de cáncer uterino. Vacunas preventivas han sido desarrolladas incluyendo a dos de los tipos virales oncogénicos más comunes hallados en población mundial. Por esta razón, el conocimiento sobre la distribución de los genotipos de VPHs presentes en cáncer cervicouterino en población ecuatoriana es crucial para la toma de decisiones en la aplicación de métodos preventivos circulantes en el mercado o el desarrollo de nuevos programas de investigación para evaluar opciones que se ajusten a nuestra realidad de país. Con este fin se planteó un estudio que sirva como línea base para la identificación molecular de VPH y sus genotipos presentes en pacientes con lesiones de alto grado de cuello uterino (NIC 3) del Hospital de SOLCA Quito. Para ello se contó con 112 muestras de tejido cervical parafinado con diagnóstico de displasia severa de cuello uterino y cáncer cervical in situ que cumplieron con los criterios de inclusión planteados para esta investigación. A dichas muestras, se les aplicó un protocolo de desparafinado con xilol, extracción de ADN con proteinasa K y purificación con Chelex-100 estandarizado en esta investigación. De las 112 muestras incluidas, 62% confirmaron la presencia de ADN genómico humano mediante la amplificación por PCR del fragmento del gen de ¿-globina, usado como control de hibridación. Para la detección de VPH se aplicó una reacción anidada y semi-anidada de PCR, donde se obtuvieron 93% de muestras positivas. Los genotipos hallados mediante RFLP fueron el VPH 6 con un 69%, seguido del VPH 31 con un 7%, el VPH 33 con un 5%, Los VPH 39 y 16 fueron encontrados en un 4%, y los VPH 51, 59, 52 y 11 en un 2%. La técnica resulto ser válida y reproducible para la detección de ADN de VPH y posterior genotipificación. Se necesitan estudios a mayor escala para la validación clínica de la técnica usada en el presente estudio.