Evaluación de la estabilidad de expresión de los genes de referencia ACTBL2, ACTB y HPRT en la línea celular McCoy ATCC CRL-1696 expuesta a nanopartículas de plata cubiertas con doxiciclina

Abstract

Los genes de referencia son genes que se expresan constantemente en las células, independientemente de su estado fisiológico y patológico. Por ello, son usados como controles comparativos en análisis de expresión génica. Estos genes pueden tener una expresión diferencial cuando son expuestos a diferentes condiciones experimentales. Por ello, se debe validar que gen o conjunto de genes de referencia son más estables ante una condición en particular. El objetivo del presente estudio es comparar la estabilidad de los genes ACTBL2, ACTB y HPRT en la línea celular McCoy ATCC CRL-1696 expuesta a nanopartículas de plata cubiertas con doxiciclina (Ag-Dox NPs). Para ello, se establecieron ensayos de qPCR utilizando ARN extraído previamente de células expuestas a Ag-Dox NPs y ARN recién extraído de células de control no expuestas. Se analizó la estabilidad de los genes de referencia usando la herramienta integral NormFinder. Los datos crudos de Cq fueron corregidos para que incluya la influencia de la eficiencia de amplificación de cada gen. Como resultado se obtuvo que el gen ACTB es el más estable dentro de los 3 genes estudiados. Los valores de estabilidad fueron los siguientes: 1,637 para ACTBL2, 0,556 para HPRT y 0,187 para ACTB; siendo el gen ACTB más estable. Los análisis de este estudio permitirán usar al gen ACTB como gen de referencia en posteriores análisis de expresión génica y en la búsqueda de posibles mecanismos de nanotoxicidad y vías de muerte celular regulada inducida por exposición a Ag-Dox NPs.