Establecimiento de un método de diagnóstico para la detección del virus de la diarrea viral bovina mediante la reacción en cadena de polimerasa

Abstract

La diarrea viral bovina (DVB) es una de las enfermedades de mayor prevalencia en el ganado vacuno, siendo la causa grandes pérdidas económicas, ya que merma los procesos de producción y reproducción. Debido a la amplia gama de manifestaciones clínicas que puede presentar esta enfermedad el diagnóstico en laboratorio es imprescindible para identificar a los animales con infecciones agudas y persistentes, para ello se puede contar con la reacción en cadena de polimerasa PCR. El objetivo de este trabajo fue estandarizar las concentraciones de reactivos y condiciones de termociclado necesarias para identificar una sección de 290 pb de la región 5’UTR de la cepa de control positivo Singer, mediante el par de cebadores P 103 y P 372, posterior a la extracción, purificación y retrotranscripción del ARN. Después de haber establecido las condiciones para la detección del fragmento de 290 pb se trabajó con 8 muestras de sangre venosa de animales con sospecha de la enfermedad procedentes de dos haciendas lecheras del cantón Mejía, a las cuales se extrajo en ARN al igual que con los controles positivos y se realizó la RT-PCR. No se detectaron amplicones para las muestras sanguíneas, sin embargo para corroborar el diagnóstico se realizaron dos PCRs de las mismas muestras, una para detectar el control interno beta actina y otra utilizando el par de cebadores para Panpestivirus PanPest 1 y PanPest 2. Se confirmó la ausencia de virus en los animales de los cuales se tenía sospecha de enfermedad mediante los cebadores para Panpestivirus y el control interno generó amplicones para todas las muestras evidenciando que la calidad del cDNA fue adecuada.