Obtención de protoplastos del mesófilo de hojas de tomate (Solanum lycopersicum Mill.) mediante digestión enzimática

Abstract

El tomate (Solanum lycopersicum Mill.) es una planta alimenticia de amplio contenido nutricional, que ha adquirido gran importancia debido a su creciente demanda. La producción de este cultivo en el país es de las menores de Sudamérica y en ocasiones no satisface la demanda interna, haciendo notar la necesidad de mejorar los rendimientos de este cultivo. Una de las alternativas para ello es la obtención y cultivo de protoplastos, que pueden generar nuevos híbridos somáticos con alta capacidad de producción y multiplicación masiva. En esta tesis se presenta la estandarización de un protocolo de obtención de protoplastos del mesófilo de hojas de tomate, para su futuro uso en técnicas de fito-mejoramiento. El aislamiento consistió en realizar dos digestiones enzimáticas consecutivas en el tejido. Primero con una solución de pectinasa al 0.25% por tres horas y luego con una solución de celulasa al 0.25% y pectoliasa al 0.20% durante 15 horas. Se utilizó el medio de aislamiento I10 con manitol al 11%, hojas de 6-12 semanas de edad e incubación a 60 RPMs en oscuridad. El rendimiento final del aislamiento fue de 1.07x105 protoplastos/ml. La purificación se realizó centrifugando los protoplastos a 700RPMs por 5 minutos y realizando una flotación en una solución CPW- Sacarosa21%, obteniendo una viabilidad promedio del 81.30%. Finalmente las células fueron cultivadas en un medio TM2 con 0.5 mgL-1 de 2,4-D, 0.5 mgL-1 de Kin y 1mgL-1 de AIA, observándose las primeras divisiones celulares a partir del día 12 del cultivo con una eficiencia del 3.96%.