Optimización de un protocolo de pcr múltiple y convencional para el diagnóstico y caracterización molecular de Nosema apis y Nosema ceranae en apiarios de las provincias de Carchi, Imbabura y Pichincha - Ecuador

Abstract

Las abejas melíferas cumplen un rol importante alrededor del mundo tanto en el ámbito económico como ecológico. Estos insectos son víctimas de enfermedades de tipo viral, bacterianas, por hongos, protozoos y ácaros. Una de las principales y más preocupantes enfermedades que afectan a las abejas, debido a que provoca colapso de colonias y pérdidas en producción de miel, es la nosemosis, causada por los microsporidios Nosema apis y Nosema cerane, este último es un parásito relativamente nuevo descubierto en las abejas de la especie Apis mellifera. Debido a que son muy similares en tamaño y forma su identificación por microscopia óptica se dificulta, por ello se utilizan técnicas moleculares, como PCR, por su mayor grado de sensibilidad y especificidad. En Ecuador no se contaba con registros sobre el tipo de microsporidio que infecta a las abejas. Por ello el objetivo de este estudio fue desarrollar un protocolo de PCR múltiple para el diagnóstico y caracterización molecular de estos parásitos. Para el desarrollo de la técnica se utilizó dos pares de cebadores específicos para N. apis y N. ceranae que amplifican fragmentos de regiones diferentes del gen RPB1. Se varió las condiciones de ciclo y las concentraciones finales de reacción de los cebadores, MgCl2, enzima Taq polimerasa y buffer de PCR, se probó también el uso de un control interno de reacción. El protocolo optimizado se aplicó para el diagnóstico de 181 colmenas ubicadas en 29 apiarios de las provincias de Carchi, Imbabura y Pichincha de Ecuador. Los resultados muestran una de prevalencia general para N. apis de 16,57% del total de colmenas analizadas (30/181), mientras que la prevalencia de N. ceranae fue de 19,89% (36/181). En Imbabura se localizó el mayor porcentaje de infección por N. apis, es decir, de las 30 colmenas positivas el 46,67% estaban en Imbabura, mientras que en Pichincha se encontró el mayor porcentaje de infección por N. ceranae (63,89%; 23/36). La caracterización molecular y el análisis filogenético confirmó que las secuencias obtenidas en Ecuador corresponde a los microsporidios N. apis, el cual no mostró variabilidad genética, y N. ceranae en donde se observó variabilidad genética. Este trabajo representa el primer reporte de N. ceranae realizado en Ecuador.