Desarrollo de la interleuquina 18 recombinante porcina en sistema de expresión a partir de Pichia pastoris, utilizada como adyuvante en vacunas en un modelo porcino

Abstract

Considerando la importancia económica de la producción porcina y que las enfermedades oportunistas en cerdos aparecen en la etapa de destete, contribuyendo a la inmuno depresión del lechón, es necesario pensar en el uso de coadyuvantes que potencien la activación del sistema inmune. Frente a esto, se propone el uso de la interleuquina 18 (IL-18), molécula con actividad inmuno-estimulante del sistema inmune y encargada de elevar la respuesta inflamatoria frente a patógenos. El presente trabajo se centró en la obtención de pIL-18 en el sistema de expresión de Pichia pastoris. Se sintetizo un vector que contenía la secuencia de la pIL-18 madura, con el cual se transformó las células de P. pastoris, cepa SMD 1168. Tras la identificación de los clones positivos se realizó la expresión de proteínas usando metanol como fuente de carbono determinando; identificando al mejor clon productor de pIL-18; el clon 150. De cinco litros de fermentación del clon 150, se purificó la proteína recombinante mediante una matriz de afinidad alcanzando una pureza estimada del 70%. La actividad biológica de la pIL-18 se midió en un ensayo de proliferación de linfocitos utilizando MTT, mostrando que la pIL-18 aumentó con un máximo de significancia la viabilidad de los linfocitos al ser inoculados con 1,5 ng/µL en un 292% ± 18,5 con respecto al control sin tratamiento. De esta forma se concluye que la pIL-18 recombinante es un potencial fármaco para estimular el sistema inmune en cerdos.