Validación del método analítico, en cultivo celular, para el aislamiento y prueba confirmatoria del virus de la estomatitis vesicular en ganado bovino

Abstract

En este estudio se busca estandarizar la técnica para aislar el virus de estomatitis vesicular (VEV) de muestras de epitelios de vacas infectadas, proporcionadas por la Agencia de Regulación y Control Fito y Zoosanitaria-Agrocalidad. La estomatitis vesicular (EV) es una enfermedad que afecta principalmente al ganado bovino y al ser clínicamente indistinguible de la Fiebre Aftosa (FA), surge la necesidad de contar con pruebas confirmatorias. El aislamiento viral es una técnica sensible, en el que se utilizan cultivos celulares, los cuales son inoculados con el virus viable presente en la muestra y una vez que ocurre replicación viral efectiva, se observan cambios morfológicos de las células hospederas o efectos citopáticos (ECP). Se realizó el crecimiento de línea celular baby hamster kidney (BHK-21) en DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) suplementado y enriquecido, de donde se pudo determinar a través de una curva de crecimiento que la mejor concentración para inocular el virus es 3000 células/ml., después de 72 horas de incubación. Se procesaron 30 epitelios que fueron definidos como positivos para VEV a través de ELISA-sándwich, con el protocolo de aislamiento viral en cultivo celular de PANAFTOSA, y con los cuales se efectuó la repetibilidad. Con ayuda de un microscopio óptico invertido se determinó la presencia de 3 muestras con ECP superior a 80% que fueron recogidas, congelas y sometidas a análisis molecular para identificación viral. El análisis molecular reveló la presencia de VEV en las muestras provenientes de aislamiento viral.