Obtención de la proteína paraflagelar recombinante de Trypanosoma vivax mediante clonación y expresión en Escherichia coli BL21 (DE3)

Abstract

La tripanosomosis bovina es una enfermedad hemoparasitaria ocasionada por diferentes parásitos del género Trypanosoma, incluyendo a la especie Trypanosoma vivax, la cual se ha reportado como la principal responsable a nivel mundial, además de poseer características más patogénicas. La sintomatología de la tripanosomosis incluye anorexia, anemia, infertilidad y abortos; generando pérdidas económicas al sector ganadero del país. Los métodos rápidos de detección a nivel de especie suelen ser escasos o presentan reacción cruzada, por lo que se ha sugerido emplear metodologías de clonación y expresión para obtener antígenos específicos que faciliten el diagnóstico. Se realizó la estandarización de una PCR para la amplificación de un gen que codifique la proteína PFR de la especie T. vivax y su posterior clonación, expresión y purificación empleando un huésped bacteriano. La estandarización del ensayo PCR se logró mediante un gradiente de temperatura de hibridación, magnesio, taq polimerasa y cebadores que resultó en una banda definida de 1500 pb. La clonación y expresión se llevó a cabo en células E. coli BL21 y se comprobó mediante electroforesis SDS-PAGE obteniéndose una proteína de aproximadamente 64 kDa. La purificación posterior se logró empleando una cromatografía de afinidad Ni-NTA, logrando un porcentaje de pureza del 75,3 %. La concentración de la proteína PFR obtuvo valores de 0,14 y 0,25 mg/ml para la cromatografía de afinidad y filtración por centrifugación, respectivamente.