Obtención y aislamiento de protoplastos de trigo (triticum aestivum), variedad Cojitambo, mediante el establecimiento de hojas y callos in vitro provenientes de semillas

Abstract

En el presente estudio se logró obtener protoplastos de trigo, variedad Cojitambo, al establecer un protocolo de desinfección de semillas en el que se encontró la necesidad de utilizar hipoclorito de sodio 2%, con tiempos de contacto de hasta diez minutos; además de tratamientos pregerminativos, con inmersión de semillas en hipoclorito de sodio 0.2% al menos tres horas; la germinación fue lograda en tiempos de 6.33 días al utilizar MS (Murashige & Skooge, 1962) suplementado con vitaminas y 2mg.L-1 de ácido giberélico; se adicionó 0.003 ppm de brasinolina para optimizar el establecimiento de brotes y lograr hojas anchas y sin enrrollamiento. Se obtuvo callos a partir de semillas en un promedio de 36 días gracias al medio L2 (Lina, 2005) suplementado con brasinolina; la mejor obtención de protoplastos a partir de las hojas y callos establecidos in vitro se logró con el coctel enzimático celulasa-macerozima 4% y pectoliasa 0.3%, junto con el medio BH3 (Grosser & Gmiter, 1990), con células cercanas al mesófilo para el caso de la hoja, los tamaños de estos protoplastos se encontraron entre 10 y 15µm y para callo entre 10 y 20µm.