Optimización del diagnóstico molecular de siclemia mediante la amplificación por OVERLAP-PCR bidireccional alelo específico

Abstract

La siclemia es una de las enfermedades genéticas más conocidas a nivel molecular, sin embargo, sigue siendo un problema de salud pública en países desarrollados y subdesarrollados. Para el diagnóstico prenatal de la siclemia se ha recurrido a técnicas moleculares como la PCR-alelo específica y la PCR bidireccional. La amplificación alelo específica mediante PCR bidireccional (BIPASA) es una técnica molecular de diagnóstico de mutaciones ampliamente difundida en el campo biomédico. Al igual que la mayoría de técnicas de diagnóstico molecular, BIPASA posee ciertas limitaciones que impiden su aplicación sobre todas las mutaciones existentes. Estas limitaciones tienen que ver con la baja capacidad refractaria que ofrecen ciertos mismatches, permitiendo el annealing de primers específicos con alelos distintos. La mutación responsable de la siclemia es un ejemplo de mutación poco refractaria, por lo que generalmente su diagnóstico mediante BIPASA no ha sido muy exitoso.