Ensamblaje del plásmido para la producción de RNA de interferencia para el silenciamiento del gen Velvet en Fusarium oxysporum f. sp. cubense raza 1 (Foc R1)

Abstract

El banano es el cultivo más importante en las regiones tropicales a nivel mundial, representa un porcentaje importante al PIB de estos países, como en el caso de Ecuador. Es categorizado como alimento de primera necesidad por su alto nivel nutricional. Sin embargo, existen varias enfermedades que atacan al cultivo del banano. La fusariosis del banano es causado por Fusarium oxysporum f. sp. cubense es una de las principales causas en las pérdidas de la industria bananera. Por esta razón es de suma importancia encontrar alternativas para neutralizar la fusariosis en el banano. El silenciamiento genético a través de la tecnología de RNA de interferencia (RNAi) es una estrategia exitosa y aprobada por investigadores de todo el mundo para contrarrestar agentes patógenos que afectan al negocio agrícola. En el presente proyecto se obtuvo un ensamblaje con el plásmido PSB1C3_A593 con el gen Velvet mediante la técnica de restricción-ligación. Este ensamblaje producirá dsRNA del gen Velvet para fabricar RNAi capaz de contrarrestar Fusarium oxysporum f. sp. cubense. El plásmido ensamblado PSB1C3_A593+Velvet se trasformó en E. coli One Shot TOP10 y HT115. Además, se analizaron 3 tratamientos (t1=30s, t2=45s y t3=60s) para mejorar la eficiencia de transformación en E. coli HT115 mediante el cambio en el tiempo de shock térmico. Se obtuvo una eficiencia de transformación en E. coli HT115 para el tratamiento t=30s de 1102,9 UFC/µg, t=45s de 13161,8 UFC/µg y t=60s de 5171,6 UFC/µg, la mejor eficiencia de transformación resultó ser el tratamiento t=45s. Las colonias transformadas con el plásmido pSB1C3_A593+Velvet se verificó a través de PCR de colonias.