Ensamblaje del plásmido para la producción de RNA de interferencia para el silenciamiento del gen SGE1 en Fusarium oxysporum f. sp. cubense raza 1 (Foc R1)

Abstract

El banano se ha convertido en un alimento básico para millones de personas y sobre todo un cultivo de importancia económica para varios países en vías de desarrollo. En Ecuador, el banano representa uno de los principales productos de exportación pero su producción se encuentra seriamente amenazado debido al marchitamiento por Fusarium causado por el hongo Fusarium oxysporum f. sp. cubense. El control del patógeno presenta dificultad debido a que logra sobrevivir durante muchos años en el suelo inclusive en ausencia de hospedador. Actualmente, no existe un control químico efectivo contra Foc TR4, además de que no se ha visto un resultado positivo en la contención del patógeno por lo que su dispersión ha puesto en alerta fitosanitaria a muchos países productores de banano. Una posible solución a este problema es la producción de biopesticidas mediante biología sintética, en este caso se planea utilizar la tecnología de silenciamiento de genes basado en la interferencia de RNA para la producción de moléculas de RNA de doble cadena, lo que permite silenciar la expresión de genes diana específicos del patógeno. Esto se logró mediante la clonación de cDNA a partir del gen SIX Gene Expression 1 (SGE1) en el plásmido PSB1C3_A593, esto se realizó mediante ensamblaje de restricción y ligación. El cassette de expresión obtenido PSB1C3_A593 + SGE1 es capaz de producir RNA de doble cadena para el silenciamiento del gen SGE1, este gen demostró ser esencial para la patogenicidad de Fusarium oxysporum f. sp. cubense. El plásmido PSB1C3_A593 + SGE1 se utilizó para la transformación bacteriana de E. coli y se comprobó mediante PCR de colonia. Adicionalmente, se realizó 3 tratamientos de transformación bacteriana a diferentes temperaturas de shock térmico (T1=40°C, T2=42°C y T3=44°C) por un tiempo de 30 segundos.