Establecimiento de las condiciones de cultivo para la expresión de la proteína E2 del subgenotipo 1b del BVDv en células CHO

Abstract

El virus de la diarrea viral bovina (BVDv) produce la enfermedad con el mismo nombre que es frecuente en la población bovina a nivel mundial y genera importantes pérdidas económicas para las industrias ganadera, láctea y cárnica. El BVDv causa infecciones permanentes que son de consideración debido a que los animales constituyen el principal reservorio de la enfermedad y son la fuente más importante de contagio. Los métodos actuales para el control de la enfermedad se basan en la vacunación y erradicación del ganado persistentemente infectado (PI). Sin embargo, la vacunación tradicional no permite diferenciar al ganado infectado del vacunado debido a la alta variabilidad antigénica del virus y los métodos de detección no permiten identificar al ganado PI debido a su baja prevalencia. Por ese motivo, las vacunas de subunidades de antígenos recombinantes, que combinan distintos subgenotipos virales, podrían ser una solución para el control del BVDv. En el presente trabajo se realizó la adaptación a condiciones de cultivo en suspensión de células de ovario de hámster chino (CHO) productoras de uno de los antígenos (E2) del BVDv subgenotipo 1b que formará parte de un candidato vacunal multivalente contra el BVDv. El diseño experimental consideró el incremento gradual por pasaje (10% y 20%), de medio libre de suero y la adición de suplementos iónicos de Ca+2 y Mg+2. Durante la adaptación la adición de suplementos no influyó positivamente en la densidad celular, viabilidad y tiempo de duplicación del cultivo. La expresión de la proteína E21b fue mayor con el incremento del 20% de medio libre de suero, obteniendo una productividad específica superior al cultivo con incremento del 10% por pasaje y al cultivo en condiciones adherentes. Las condiciones de cultivo establecidas en el presente trabajo podrán ser utilizadas en la obtención de los otros subgenotipos de BVDv.