Estandarización de métodos de diagnóstico de fusariosis causada por Fusarium oxysporum f. sp. cubense-Raza 4 Tropical (FocR4T) en plantas de banano

Abstract

El marchitamiento por Fusarium ha sido considerado como una de las enfermedades más destructivas del banano a nivel mundial, debido a su rápida capacidad de infección y al ser difícil de controlar. Hasta el momento se ha observado la presencia de cuatro razas de F. oxyspourm f. sp. cubense, de las cuáles solo tres atacan al banano. La raza 1, la raza 2 y actualmente la raza 4 tropical (R4T) que es considerada como el principal problema patológico que enfrenta el cultivo de banano del subgrupo “Cavendish”. La presencia de R4T no implica solamente un problema para los países productores de banano también implica un colapso en la seguridad alimentaria. Por lo tanto, se ha visto necesaria la implementación de métodos de diagnósticos que sean rápidos y que su nivel de eficiencia sea alto. Siendo el objetivo de este trabajo estandarizar los métodos de diagnóstico de fusariosis causada por Fusarium oxysporum f. sp. cubense-Raza 4 Tropical (Foc R4T) en plantas de banano. A partir del análisis de los protocolos presentados en el Acuerdo Ministerial N° 142 de Agrocalidad, donde se utilizan los primers de Dita et al., 2010 para la PCR punto final y los primers de Aguayo et al., 2017 para la PCR cuantitativa, para esto se plantearon dos ensayos que tuvieron como objetivo determinar la eficiencia de las pruebas moleculares a diferentes concentraciones de ADN y determinar la especificidad de los cebadores para el diagnóstico de Fusarium, realizando diferentes diluciones del ADN fúngico, y la dilución del ADN del hongo con el ADN de muestras de banano que se obtuvieron del laboratorio de IDgen. A partir de los resultados obtenidos de la PCR punto final se fijó una nueva programación de amplificación que ayudó a disminuir el tiempo final. Para la interpretación de resultados de la qPCR se determinó el valor de la eficiencia de la prueba para el primer y segundo ensayo dándonos del 100% y un valor mayor al 100% respectivamente, lo que nos indica que existe contaminación, o la muestra de ADN es de baja calidad por lo que se recomienda realizar nuevamente el ensayo.