Optimización de las herramientas moleculares para la identificación de insectos de la familia Tabanidae del marcador molecular COI

Abstract

La familia Tabanidae son considerados insectos de alto impacto económico en el mundo debido a su dieta hematófaga, siendo estos además vectores de múltiples enfermedades de afección directa al ganado bovino, ovino y bufalino. La presente investigación trata el establecimiento de un protocolo para la evaluación molecular de especies de tábanos presentes en Ecuador mediante un protocolo de PCR Barcoding del gen COI. Se trabajaron muestras de dípteros recolectadas en las provincias de Pichincha, Orellana, Manabí, Napo, Sto. Domingo de los Tsáchilas, Tungurahua, Cotopaxi e Imbabura, estableciendo un protocolo de extracción de ADN mediante variaciones del buffer de lisis y el agente de separación de fases, denotando una sinergia entre el buffer compuesto por 50 mM Tris-HCl, 20mM EDTA, 400 mM NaCl, 1% SDS y el cloroformo/alcohol isoamílico 24:1. Se amplificó el gen COI mediante una PCR variando la temperatura de hibridación de los cebadores, la cantidad de magnesio en la reacción y la cantidad de ADN, fijándose los mejores amplicones a 51°C, 2.5 mM de MgSO4 y 25 ng de ADN. Mediante un análisis Neighbor Joining a partir de secuencias del gen COI de tábanos, obtenidas de bases de datos, se demostró que la técnica permite discernir a nivel de género y especie a los insectos de esta familia. De este modo se establece una técnica estandarizada para un análisis taxonómico de esta Familia en Ecuador.