Desarrollo de un sistema de vector binario de Agrobacterium tumefaciens para la edición del promotor del gen RPM1 de banano

Abstract

El banano (Musa spp.) se posiciona como el cuarto alimento más consumido a nivel mundial, con Ecuador liderando la producción y exportación global de la variedad Cavendish, abarcando el 29% del mercado internacional. El hongo Fusarium oxysporum f. sp. cubense Raza 4 Tropical (Foc R4T) representa una seria amenaza para la producción bananera en regiones tropicales y subtropicales, persistiendo en el suelo durante décadas y propagándose fácilmente, lo que provoca síntomas devastadores en las plantas.

El objetivo de esta tesis es transferir un vector binario Ti que contiene el gen RPM1, asociado a la resistencia a la fusariosis, desde E. coli JM109 a Agrobacterium tumefaciens AGL1. El plásmido pAGM4351, que contiene el sistema CRISPR-Cas9, se utilizará para editar el promotor del gen RPM1 en el genoma del banano. Se compararon dos métodos de transformación bacteriana, Electroporación y Choque térmico, para determinar su eficiencia en la introducción del vector pAGM4351en A. tumefaciens. Además, se desarrolló un protocolo de crioconservación de cepas transformadas, utilizando glicerol y DMSO a diferentes concentraciones, para evaluar su eficacia en la conservación a largo plazo a -80°C. Posteriormente, se llevó a cabo la extracción genómica del banano Cavendish y se realizó la PCR para amplificar el fragmento diseñado del gen RPM1.

Los resultados mostraron que la electroporación fue el método más eficiente para transformar Agrobacterium, mientras que la crioconservación con glicerol demostró ser efectiva para mantener la viabilidad celular a bajas temperaturas. Este proceso sienta las bases para futuras investigaciones que permitan infectar suspensiones celulares de banano y editar la región promotora del gen RPM1 en el genoma, con el fin de obtener variedades resistentes.