Estandarización de la prueba del anticuerpo neutralizante unido a una peroxidasa (NPLA) para la detección de anticuerpos contra el virus de Peste Porcina Clásica.

Abstract

El NPLA permite evaluar la capacidad de los anticuerpos presentes en un suero para neutralizar la infección del virus in vitro, esta técnica mediante anticuerpos monoclonales permite identificar entre animales enfermos y vacunados. Para la estandarización del ensayo primero se determinó el crecimiento de la línea celular de riñón de cerdo (PK-15) y su viabilidad celular con distintas densidades celulares y tiempos de incubación, estableciendo una densidad inicial de 12x103 células/pocillo para todos los ensayos y realizando una lectura a las de 72 h post-infección del virus de PPC. Mediante inmunoperoxidasa directa se evaluó la replicación viral en la línea celular y la cuantificación de los títulos virales infectivos (DICT50/ mL) replicando el virus semilla (cepa Alfort 187) en la línea celular PK-15 logrando después de 4 subcultivos sucesivos un título infectivo de 108.26 DICT50 /mL. Los títulos de anticuerpos neutralizantes mediante NPLA de las muestras de suero fueron altos entre 1.8 y 7.85 (log10). En sensibilidad analítica los sueros con títulos de 7.8 (log10) son capaces de neutralizar el virus hasta una dilución 1:1280. El ensayo de NPLA demostró una alta especificidad al no neutralizar sueros exclusivos ni inclusivos del género Pestivirus.