Abstract:
Fusarium oxysporum f. sp. cubense raza 4 (Foc R4) es un hongo fitopatógeno de gran interés para la industria agrícola, la ingeniería genética mediante Crispr cas es una herramienta que permite editar genes para el mejoramiento vegetal. El objetivo de la presente tesis se centra en la construcción de un vector plasmídico que contenga una nucleasa, un promotor para monocotiledóneas y un ARN guía (sgRNA) dirigido a la zona promotora del gen RIN4, conocido por su implicación en la resistencia a la fusariosis. La metodología aplicada involucró el diseño de sgRNA, considerando criterios de especificidad, eficiencia de corte y minimización de efectos secundarios no deseados. Los componentes de los plásmidos se ensamblaron utilizando la técnica Golden Gate en múltiples niveles. La validación de cada producto final se realizó mediante marcadores de selección basados en antibióticos y el sistema de inducción Lacz. Luego, se evaluó la eficiencia de transformación en tres cepas de Escherichia coli utilizando el método de choque térmico, y se confirmaron los resultados mediante amplificaciones por PCR colony. Los hallazgos de esta investigación destacaron al sgRNA2 como la opción más adecuada para la construcción del vector plasmídico. Además, se identificó que la cepa JM109 mostró la más alta eficiencia de transformación entre las cepas evaluadas. Los análisis de este estudio sientan las bases para futuros estudios relacionados con la transferencia de plásmidos en Agrobacterium, como paso previo a la inserción de genes en plantas. En conjunto, esta investigación contribuye al desarrollo de estrategias de mejoramiento genético para abordar la resistencia a la fusariosis en plantas de Musa acuminata.
