Implementación de herramientas moleculares para la identificación de microorganismos en miel de abejas sin aguijón

Abstract

La miel de abejas sin aguijón alberga un microbioma diverso proveniente del tracto digestivo de la abeja, néctar, polen, flores y alrededores del nido. En este sentido, la caracterización del microbioma de miel se ha centrado en métodos tradicionales basados en cultivo que presentan limitaciones. Puesto que, alrededor del 99% de especies microbianas no son cultivables. Por ello, el objetivo del presente estudio fue implementar herramientas moleculares para la identificación de microorganismos en ADN extraído a partir de miel de abejas sin aguijón. Debido al alto contenido de polisacáridos, polifenoles y ácidos orgánicos que interfieren en aplicaciones moleculares, se optimizó un protocolo de extracción basado en CTAB. Las modificaciones incluyeron ajuste de ciclos de centrifugación, volumen de RNAsa A, tiempo de incubación y secuencia de adición de enzimas durante la lisis. El protocolo optimizado se aplicó a 51 muestras de miel de abejas sin aguijón de los géneros Melipona sp., Scaptotrigona sp., Tetragona sp., Ptilotrigona sp., Tetragonisca sp., y Nannotrigona sp. El rendimiento y la calidad del ADN extraído se evaluó mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa, confirmando la obtención de ADN de alto peso molecular, con valores de concentración de ADN similares a los previamente reportados y datos de pureza 260/280 dentro del rango óptimo para todas las muestras analizadas. Así mismo, la presencia de ADN bacteriano y fúngico se confirmó tras la amplificación de gen 16S rRNA y la región ITS, respectivamente. La amplificación para ambos marcadores moleculares fue exitosa en el 84.31% de las muestras